Peamine erinevus - transformandid vs rekombinandid
Rekombinatsioon ja transformatsioon on geenitehnoloogias kaks üliolulist etappi, kus organismi omadusi muudetakse tahtlikult, manipuleerides selle geenimaterjaliga. Rekombinatsioon on protsess, kus võõras DNA viiakse vektorgenoomi ja moodustub rekombinantne DNA molekul. Transformatsioon on järgmine etapp, kus rekombinantne molekul viiakse peremeesorganismi. Peremeesrakk või organism hõlbustab rekombinantse molekuli ekspressiooni. Peamine erinevus transformantide ja rekombinantide vahel on see, et transformandid on rakud või organismid, mis võtavad rekombinantse molekuli sisse ja hõlbustavad ekspressiooni, samas kui rekombinandid on vektorid, mis võimaldavad sisestada võõra DNA selle genoomi ja transportida ekspressiooniks peremeestransformantidesse.
SISU
1. Ülevaade ja peamised erinevused
2. Mis on transformandid
3. Mis on rekombinandid
4. Võrdlus kõrvuti - transformandid vs rekombinantid
5. Kokkuvõte
Mis on transformandid?
Transformandid on rakud või organismid, milles ekspressiooniks võetakse rekombinantne DNA. Baktereid kasutatakse geenitehnoloogias tavaliselt peremeesorganismidena, kuna neid on laboritingimustes lihtne kasvatada, paljuneda ja käsitseda ning transformatsiooniprotsess on teiste organismidega võrreldes lihtne. Geenitehnoloogias on kõige populaarsem peremeesbakter bakter E coli.
Transformatsiooniprotsessi käigus indutseeritakse peremeesrakud rekombinantide omastamiseks. Mõni peremeesrakk ei võta siiski rekombinantseid molekule. Neid tuntakse mittetransformantidena ja rakke, mis sisaldavad rekombinantseid DNA molekule, nimetatakse transformantideks. Transformantide valik mittetransformantidest toimub molekulaarbioloogias selekteeritavate markerite abil. Valitavad markerid sisestatakse vektorgenoomi koos DNA insertiga. Tavaliselt kasutatavad valitavad markerid on antibiootikumiresistentsed geenid. Markergeenid hõlbustavad transformantide eristumist ja jätkavad protsessi. Pärast transformatsiooniprotsessi kasvatatakse bakter antibiootikume sisaldavas söötmes. Ainult transformandid on võimelised selles keskkonnas kasvama, kuna neil on rekombinandid sees.
Kui rekombinantne DNA molekul on peremeesorganismis transformeeritud, võib võõra DNA kas integreerida peremeesraku genoomi või jääda tsütoplasmasse integreerimata. Kuid võõr-DNA ekspressioon ja replikatsioon toimuvad peremeesorganismis ja annavad protsessist soovitud tulemuse.
Mis on rekombinandid?
Rekombinant on organism või rakk, millel on rekombineeritud võõrast DNA-d sisaldav genoom. Rekombinandid on geenitehnoloogia protsessi tulemus. Need on kunstlikult konstrueeritud in vitro, lisades huvipakkuvad geenid ja modifitseerides genoomi. Sageli toimivad bakterite plasmiidid ja bakteriofaagid rekombinantidena geenitehnoloogias. Sellel on erineva DNA kimäär. Rekombinantne DNA molekul kannab võõrorganismi peremeesorganismi ning paneb selle soovitud produkti ekspresseerima ja moodustama.
Rekombinantsed molekulid valmistatakse restriktsiooni endonukleaaside ja DNA ligaaside abil. Soovitud DNA fragment eraldatakse algsest organismist ja sisestatakse rekombinantse transformatsiooni saamiseks vektorisse. Huvipakkuva geeni lõikamine ja vektororganismi avamine peaks toimuma sama restriktsiooniensüümi abil, et luua omavahel kokkusobivad kleepuvad otsad. Kui võõras DNA on vektorgenoomi ühendatud, tuntakse seda rekombinantse või rekombinantse DNA molekulina.
Joonis 02: rekombinantne DNA
Mis vahe on transformantidel ja rekombinantidel?
Erinev artikkel keskel enne tabelit
Transformandid vs rekombinandid |
|
| Transformandid on rakud, mille sees on rekombinantne DNA molekul. | Rekombinandid on kandemolekulid, mille võõras DNA on sisestatud oma genoomi. |
| Võõra DNA avaldumine | |
| Need on peremeesrakud, mis on võimelised ekspresseerima rekombinantset DNA-d. | Nad peaksid suutma peremeesorganismis end paljundada. |
| Valik | |
| Rakud, mida saab kergesti kasvatada ja paljuneda, valitakse peremeesrakkudeks. | Need peavad olema hõlpsasti eraldatavad ja sisaldama valitavaid markereid. |
Kokkuvõte - transformandid vs rekombinantid
Transformandid on rakud või organismid, mille sees on rekombinantsed DNA molekulid. Rekombinandid on organismid või rakud, mis on läbinud geneetilise rekombinatsiooni ja mille genoomides on võõras DNA. Bakterirakke kasutatakse sageli peremeesrakkudena transformatsiooniks ning plasmiide ja bakteriofaage kasutatakse sageli vektoritena rekombinantse DNA tehnoloogias. See on erinevus transformantide ja rekombinantide vahel.
