Peamine erinevus - Phusion vs Taq Polymerase
DNA polümeraasid on molekulaarbioloogia tehnikates laialdaselt kasutatavad ensüümid ja neid leidub loomulikult ka kõigis DNA replikatsiooniga organismides. Need on võtme polümeriseerivad ensüümid, mis on seotud replikatsiooni ajal. DNA polümeraas on võimeline lisama nukleotiide DNA ahela vabasse 3'-otsa, põhjustades seeläbi uue ahela pikenemise. Praegu on haigusdiagnostikas ja tööstuslikes rakendustes toimuva molekulaarbioloogia arengute tõttu oluline valmistada mitmesuguste kasulike omadustega polümeraase. See suurendab meetodi täpsust ja muudab selle tehnika kiiremaks. Phusion ja Taq polümeraas on kaks kaubanduslikult toodetud termostabiilset polümeraasi ensüümi, mida kasutatakse spetsiaalsetes molekulaarsetes rakendustes. Phusion on Pyrococcus furiosus'est eraldatud DNA polümeraas ja seda kasutatakse truuduse suurendamiseks peamiselt kloonimiskatsetes. Taq DNA polümeraas on tavaline DNA polümeraas, mida kasutatakse polümeraasi ahelreaktsioonis (PCR), ja see on eraldatud termostabiilsest bakterist; Thermus aquaticus. Peamine erinevus kahe ensüümi vahel on lähtemikroorganism. Fusioon eraldatakse ekstremofiilist Pyrococcus furiosus, Taq polümeraas aga termofiilist Thermus aquaticus. Taq polümeraas eraldatakse termofiilist Thermus aquaticus. Taq-polümeraas eraldatakse termofiilist Thermus aquaticus.
SISU
1. Ülevaade ja peamine erinevus
2. Mis on fusioon
3. Mis on Taq polümeraas
4. Fusiooni ja Taq polümeraasi sarnasused
5. Kõrvuti võrdlus - Phusion vs Taq polümeraas tabelina
6. Kokkuvõte
Mis on Phusion?
Fusioon-DNA polümeraas on uudne polümeraas, mis on valmistatud ensüümi eraldamisel Pyrococcus furiosusest, mis on ekstremofiilne arheia. Need mikroobid elavad äärmiselt kõrge temperatuuri tingimustes, muutes polümeraasi seeläbi väga kuumuskindlaks polümeraasiks. Fusioonpolümeraasi kasutatakse äärmise täpsuse saavutamiseks tavapärase termostabiilse polümeraasi suhtes; Taq polümeraas. Fusioonpolümeraas on võimeline võimendama pikki matriitsi kuni 7,5 kb genoomset DNA-d. Fusioonpolümeraasi optimaalne polümerisatsioonivõime on temperatuuril 72 ° C. Fusioonit kasutatakse ka toodete kloonimisel sekveneerimiseks, ekspressioonianalüüsiks ja mutatsioonianalüüsiks.
Fusioon-DNA polümeraasil on 3 '- 5' eksonukleaasi aktiivsus. See võimaldab pärast sünteesi äsja sünteesitud ahela korrektsiooni lugeda. Seega saab nukleotiidide mittevastavusi kergesti parandada. Seega on selle veamäär väiksem. Phusion polümeraasi üldised eelised on;
- Äärmuslik truudus
- Suur kiirus ja lühendatud pikendusaeg
- Tugev reageerimine ja nõuab minimaalset optimeerimist
- Kõrge saagikus
Joonis 01: Fusioon
Fusioonpolümeraasi peamine puudus on see, et see inhibeeritakse deoksüuridiintrifosfaadi (dUTP) juuresolekul. Kui reaktsioonisegusse on kogunenud dUTP-d, võib see pärssida fusioonpolümeraasi toimet. Seda välditakse enne ensüümi lisamist reaktsioonisegu töötlemisel dUTPaasiga. Praegu kasutatakse selle probleemi lahendamiseks Phusion-polümeraasi asemel DUTP-resistentset Phusion-polümeraasi varianti, mida nimetatakse Pfu Turbo.
Mis on Taq Polymerase?
Taq DNA polümeraasi leiutis on molekulaarbioloogia valdkonnas murrangulise pöörde teinud. See lahendas suure DNA amplifikatsiooni probleemi. Taq DNA polümeraas on termiliselt stabiilne polümeraasi ensüüm, mis ekstraheeritakse ja eraldatakse termofiilsest bakterist Thermus aquaticus. Selle ensüümi avastamine viib PCR arenguni. See ensüüm on võimaldanud DNA amplifikatsioonis kasutada polümeraasi ahelreaktsiooni tavapäraste töömahukate kloonimistehnikate asemel. PCR-i kasutatakse nüüd molekulaardiagnostikas, põllumajandus- ja tööstusvaldkonnas ning tehnikale on lisatud palju uusi variatsioone.
Joonis 02: Taqi polümeraas
Taq DNA polümeraas toimib optimaalses temperatuurivahemikus 72 ° C - 80 ° C. Taq DNA polümeraas nõuab koefaktorit; magneesium oma funktsiooni jaoks. Taq polümeraasil puudub 3 '- 5' korrektuurivõime, seetõttu on Taq DNA polümeraasi veamäär kõrge võrreldes uuemat tüüpi DNA polümeraasidega, näiteks Phusion polümeraas jne. Kuid Taq DNA polümeraasi populaarsus on endiselt ensüümi mugavuse ja paindlikkuse tõttu sama kogu teadusmaailmas.
Millised on fusiooni ja Taq polümeraasi sarnasused?
- Nii Phusion kui ka Taq polümeraasi ensüümid on polümeriseerivad ensüümid, mis on võimelised lisama nukleotiide DNA ahela 3'-vabasse otsa.
- Nii Phusion kui ka Taq polümeraasid vajavad polümerisatsiooni alustamiseks praimeri järjestust.
- Nii Phusion kui ka Taq polümeraasid on kuumusstabiilsed.
- DNA võimendamiseks kasutatakse PCR-mehhanismides nii Phusion kui ka Taq polümeraase.
- Polümeraasi lisamisel reaktsioonisegule lisatakse ensüümi efektiivsuse tagamiseks viimasena nii Phusion kui ka Taq polümeraasid.
- Molekulaarbioloogia eksperimentaalsetel eesmärkidel sünteesitakse nii Phusion kui ka Taq polümeraase.
- Nii Phusion kui ka Taq polümeraasid vajavad oma funktsiooni täitmiseks kofaktorit.
Mis vahe on fusioonil ja Taq-polümeraasil?
Erinev artikkel keskel enne tabelit
Phusion vs Taq Polymerase |
|
| Fusioon on DNA polümeraas, mis on eraldatud Pyrococcus furiosus'est ja mida kasutatakse peamiselt kloonimiskatsetes truuduse suurendamiseks. | Taq DNA polümeraas on tavaline DNA polümeraas, mida kasutatakse polümeraasi ahelreaktsioonis (PCR), ja see on eraldatud termostabiilsest bakterist Thermus aquaticus. |
| Allikas Organism | |
| Fusioon ekstraheeritakse ekstremofiilsetest arheedest - Pyrococcus furiosus. | Need kirjandusteosed ulatuvad koloniseerimisperioodist dekoloniseerimisperioodini. |
| Tõendite lugemise oskus | |
| Phusionis on olemas 3 '- 5' korrektse lugemise võime. | Taq polümeraasis puudub 3 '- 5' kindel lugemisvõime. |
| Truudus | |
| Phusioniga on olemas kõrge truudus. | Taq polümeraas näitab madalat täpsust. |
| Võimendus | |
| Fusioon on võimeline võimendama pikki DNA fragmente. | Taq polümeraas on võimeline võimendama palju lühemaid DNA fragmente. |
| dUTP mürgistus | |
| Fusioonitoimet pärsib kummaline akumuleerumine. | Dupt ei pärsi Taq polümeraasi. |
Kokkuvõte - Phusion vs Taq polümeraas
Phusion ja Taq DNA polümeraas on kaks kuumakindlat polümeraasi, mida kasutatakse PCR-meetodites. Fusioon on polümeraas, mis on eraldatud ekstremofiilist Pyrococcus furiosus, Taq aga termostabiilsetest bakteritest Thermus aquaticus. Taq DNA polümeraasi avastamine viib PCR leiutiseni. Phusionil on Taqi ees palju eeliseid, mis on teinud Phusionist parema võimaluse ülitäpse DNA tootmiseks. Taq-polümeraasi kasutatakse siiski PCR-is standardse polümeraasi ensüümina. See on erinevus Phusioni ja Taq polümeraasi vahel.
