Peamine erinevus - YAC vs M13 faagivektor
DNA kloonimine on oluline protsess, mis võimaldab paljundada organismide olulisi DNA fragmente. See nõuab spetsiifilise DNA ühendamist vektor-DNA-ga, et luua rekombinantne DNA, mis transformeerub peremeesorganismiks. Vektor on DNA molekul, mis käitub kandurina võõrkehalise materjali kandmiseks teise rakku või organismi. See peaks olema võimeline paljunema peremeesorganismis ja tooma rekombinantse DNA mitu koopiat. DNA kloonimisel kasutatakse erinevaid vektoreid. Pärmi tehiskromosoom (YAC) ja M13 faagivektor on nende hulgas kahte tüüpi. Peamine erinevus YAC ja M13 faagivektori vahel on see, et YAC on kunstlik kromosoom, mis paljuneb pärmirakkudes, samas kui M13 faagivektor on bakteriofaagi M13 üheahelaline ümmargune DNA, mis replikeerub E Coli rakkudes.
SISU
1. Ülevaade ja peamine erinevus
2. Mis on YAC
3. Mis on M13 faagivektor
4. Võrdlus kõrvuti - YAC vs M13 faagivektor
5. Kokkuvõte
Mis on YAC-vektor?
YAC on kunstlikult ehitatud kromosoom, millel on võime kanda suurt osa võõrast DNA-d ja paljuneda pärmirakkudes. Sellel on replikatsiooni ja stabiilsuse seisukohalt olulised tsentromeer-, telomeer- ja autonoomselt korduvad järjestused. YAC-il peaks olema ka selektiivne marker või markerid ja restriktsioonikohad, et muuta see efektiivseks kloonimisvektoriks. Suuri järjestusi vahemikus 1000 kb kuni 2000 kb saab sisestada YAC-i ja viia pärmi.
Joonis 01: YAC-vektor
Mis on M13 faagivektor?
Bakteriofaag M13 on viirus, mis nakatab ja paljuneb E Coli-s. M13 bakteriofaagi genoom on väikese suurusega, umbes 6,7 kb. See on üheahelaline, ümmargune ja positiivse meelega DNA. See viirus nakatab spetsiifiliselt E Coli baktereid F piluse kaudu. Kui see siseneb ssDNA-sse bakterisse, sünteesib see oma komplementaarse ahela ja muutub dsDNA-ks või M13 replikatiivseks vormiks (RF). RF võib peremeesorganismis käituda nagu plasmiid. DsDNA replikeerub E Coli-s ja toodab uusi faage kandvat ssDNA-d. Need uued faagid eralduvad E Coli-st pidevalt peremeesrakku tapmata. Kuid nakkus aeglustab E Coli kasvu. dsDNA-d saab ekstraheerida bakterirakkudest ja kasutada vektoritena DNA kloonimisel. Neid tuntakse kui M13 faagivektoreid. Neid saab hõlpsasti manipuleerida ja kasutada sarnaselt plasmiidvektoritega.
Nendele M13 faagidele omane nakatumisvõime on hea kvalifikatsioon, mida saab kasutada geenikloonimise vektorina. M13 vektoriks arendamisel tuleks selle genoomi lisada mitu elementi. Need on lac-repressori (lac I) valgu geen, lac Z-geeni operaator-proksimaalne piirkond, lac-promootor ja mitmekordne kloonimissait (polülinker). Kui vektoritena kasutatakse M13 dsDNA-d, saab seda käsitleda plasmiidvektorina. SsDNA M13 kasutamisel on siiski eeliseid DNA järjestamisel ja kohapeal suunatud mutageneesis.
Kuna M13 faagivektoril on lacZ piirkonnas mitu kloonimissaiti, saab rekombineeritud vektoreid hõlpsasti tuvastada IPTG ja X-Gal sisaldavate agarplaatide sinise / valge koloonia sõeluuringute abil. Plaatidel toodetud sinised naastud ei sisalda rekombineeritud faage. Seetõttu saab kloonimise eesmärgil valida sisestustega faagid.
Joonis 02: Bakteriofaag M13
Mis vahe on YAC-l ja M13 faagivektoril?
Erinev artikkel keskel enne tabelit
YAC vs M13 faagi vektor |
|
| YAC on geneetiliselt muundatud kromosoom, millel on võime kanda suurt osa võõrast DNA-d ja paljuneda pärmirakkudes. | M13 faagivektor on bakteriofaagi M13 poolt välja töötatud viirusvektor, mida kasutatakse võõra DNA sisestamiseks E Coli. |
| Eesmärk | |
| YAC-id kavandati suurte genoomse DNA fragmentide kloonimiseks pärmi. | M13 faagivektoreid kasutatakse võõra DNA sisestamiseks E Coli. |
| Sisesta pikkus | |
| YAC-d võivad sisaldada megabaasi suuruseid genoomseid lisandeid (1000 kb - 2000 kb). | Lisade suurus on umbes 1500 bps. |
| Ehitus | |
| YAC DNA-d on raske tervena puhastada ja YAC vektorisüsteemi genereerimiseks on vaja suurt kontsentratsiooni. | See toimub tsüklilise fotosünteesiva elektronahela kaudu. |
| Stabiilsus | |
| YAC on ebastabiilne. | M13 faage saab hõlpsasti ekstraheerida. |
| Suurus | |
| Ensüümid on suuremad molekulid. | M13 faagid on stabiilsed kui YAC. |
Kokkuvõte - YAC vs M13 faagivektor
YAC on kunstlikult loodud vektorisüsteem, mis kasutab pärmseente kromosoomi spetsiifilist piirkonda, et sisestada pärmirakkudele suuri geneetilise materjali segmente. M13 faagivektor on bakteriofaagist M13 saadud vektorisüsteem, mis kasutab peremeesorganismina E coli. See on peamine erinevus YAC ja M13 Phage Vector vahel. Mõlemad on võrdselt kasulikud rekombinantse DNA tehnoloogias ja geenide kloonimisel.
