Peamine erinevus - SDS-leht vs Western Blot
Western blot on tehnika, mis tuvastab valguproovist spetsiifilise valgu. Seda tehnikat viiakse läbi mitmel põhietapil: geelelektroforees, blottimine ja hübridisatsioon. Naatriumdodetsüülsulfaadi polüakrüülamiidgeelelektroforees (SDS Page) on omamoodi geelelektroforeesi tehnika, mida kasutatakse valkude eraldamiseks nende suuruse (molekulmass) järgi. Western blot on spetsiaalne blotimembraani leht, mida kasutatakse valkude sama mustri ülekandmiseks SDS Page. Peamine erinevus SDS-lehe ja Western bloti vahel on see, et SDS Page võimaldab segus valke eraldada, Western blot võimaldab aga konkreetse valgu segust tuvastamist ja kvantifitseerimist. Mõlemad on kasulikud valguanalüüsi uuringutes.
SISU
1. Ülevaade ja peamised erinevused
2. Mis on SDS-leht
3. Mis on Western Blot
4. Võrdlus kõrvuti - SDS-leht vs Western Blot
5. Kokkuvõte
Mis on SDS-leht?
SDS Page on geelelektroforeesi tehnika, mida kasutatakse valkude eraldamiseks. Seda kasutatakse tavaliselt biokeemias, geneetikas, kohtuekspertiisis ja molekulaarbioloogias. Kui valgud on proovist ekstraheeritud, viiakse need SDS-st ja polüakrüülamiidist koosnevale geelile. SDS on anioonne detergent, mida kasutatakse valkude (denatureerivate valkude) lineariseerimiseks ja lineaarsete valkude negatiivse laengu andmiseks proportsionaalselt nende molekulmassiga. Polüakrüülamiidist saab geeli kindel tugi. Negatiivselt laetud denatureeritud valgud migreeruvad seadme geeli kaudu seadme positiivse otsa poole. Valkude suuruse järgi on rändekiirus valkude lõikes erinev ja toimub eraldumine. Seetõttu on SDS-leht kasulik üksikute valkude eraldamiseks nende suuruse põhjal.
Polüakrüülamiidgeeli valmistamine valkude fraktsioneerimiseks on SDS - i oluline samm. Polüakrüülamiidi õige kontsentratsioon ja kasutatud ristsiduva aine tüüp mõjutavad tugevalt geeli füüsikalisi omadusi, mis muudab erinevate valkude tegeliku eraldamise. Tõhusaks eraldamiseks tuleks geeli pooride suurust korralikult reguleerida. SDS-i lehte peetakse siiski kõrge eraldusvõimega valkude eraldamise tehnikaks.
SDS Page tehnikal on valgu analüüsimisel suur piirang. Kuna SDS denatureerib valke enne eraldamist, ei võimalda see tuvastada ensümaatilist aktiivsust, valkudega seonduvaid koostoimeid, valgu kofaktoreid jne.
Joonis 01: ohutuskaardi leht
Mis on Western Blot?
Western blot-tehnika võimaldab tuvastada spetsiifilist valku valgusegust ning mõõta valgu kogust ja molekulmassi. Western blot on membraan, mida kasutatakse blot-protseduuri käigus SDS-polüakrüülamiidgeeli valgumustrite peegelpildi saamiseks. Western blotiks kasutatav membraan koosneb enamasti nitrotselluloosist või polüvinülideendifluoriidist (PVDF). Ülekantud valguga membraani saab kasutada soovitud valgu tuvastamiseks. Hübridiseerimise teel soovitud valgu tuvastamiseks on vaja kvaliteetset antikeha. Antikeha seondub oma spetsiifilise antigeeniga ja näitab soovitud antigeeni olemasolu, milleks on valk.
Valkude ülekandmine SDS polüakrüülamiidgeelilt Western blotisse toimub elektroblotiga. See on tõhus ja kiire meetod, mis paneb valgud geelist elektroforeeruma ja kanduma nitrotselluloosmembraanile (western blot).
Joonis 02: Western Blot
Mis vahe on SDS-lehel ja Western Blotil?
Erinev artikkel keskel enne tabelit
SDS-leht vs Western Blot |
|
| SDS Page on geelelektroforeesi tehnika. | Western blot on meetod, mis viiakse läbi membraanil konkreetse valgu tuvastamiseks segust. |
| Kasutage | |
| SDS-leht võimaldab valke eraldada vastavalt nende suurusele. | Western blot võimaldab valkude ülekandmist SDS-i lehegeelile, muutmata selle mustrit, ja võimaldab hübridiseerumist spetsiifiliste antikehadega. |
| Puudused | |
| Valgu denatureerimine, kõrge hind ja neurotoksiinikemikaalide olemasolu on selle tehnika puudused. | See tehnika on aeganõudev ja nõuab hästi kogenud isiklikke ja konkreetseid kontrollitud tingimusi. |
Kokkuvõte - SDS-leht vs Western Blot
SDS-leht ja Western blot on kaks valguanalüüsiga seotud meetodit. SDS Page võimaldab valkude geelis hõlpsat eraldamist vastavalt nende molekulmassile. Western blot aitab spetsiifiliste antikehadega hübridisatsiooni abil kinnitada spetsiifilise valgu olemasolu ja kogust. See on erinevus SDS-lehe ja Western bloti vahel.