Peamine erinevus - mööduv vs stabiilne transfektsioon
Transfektsioon on protsess, mis on seotud eukarüootsete rakkude geeniülekandega keemiliste või füüsikaliste meetodite abil. Transfektsiooni võib liigitada kahte põhitüüpi, mida nimetatakse ajutiseks transfektsiooniks ja stabiilseks transfektsiooniks. Mööduva transfektsiooni ajal ei integreeru huvipakkuv geen peremeesorganismi genoomiga ja ekspresseerub lühiajaliselt peremehe sees, samas kui stabiilse transfektsiooni korral integreerub huvipakkuv geen peremeesorganismi genoomiga ja püsib pikka aega mitme põlvkonna vältel. See on peamine erinevus mööduva ja stabiilse transfektsiooni vahel. Mõlemal juhul on transfektsioon edukas ja geenid avalduvad.
SISU
1. Ülevaade ja peamine erinevus
2. Mis on ajutine transfektsioon
3. Mis on stabiilne transfektsioon
4. Kõrvuti võrdlus - mööduv vs stabiilne transfektsioon
5. Kokkuvõte
Mis on ajutine transfektsioon?
Transfektsioon on oluline vahend geenide sisestamiseks eukarüootsetesse rakkudesse. Kahe transfektsioonitüübi seas on mööduv transfektsioon geenide ülekandmisel levinud viis. Vektori kaudu muundatakse võõrgeenid peremeesrakkudes. Kui võõras DNA siseneb peremeesrakku, on sellel kaks võimalust. See võib kas integreeruda peremeesgenoomiga ja paljuneda või jääda sisse ilma genoomi integreerumata. Ajutisel transfektsioonil on sisestatud geenide ajutine ekspressioon ilma peremeesorganismi integreerumata. Geenid ekspresseerivad ja toodavad kodeeritud valku raku jagunemiseni. Integreerumise võimetuse tõttu ei saa see siiski paljuneda ja tulevastesse põlvedesse siseneda. Seda tüüpi transfektsioon on edukas lühikese aja jooksul. Rakkude jagunemise käigus või mõne muu teguri tõttu laguneb võõras DNA. Mööduvat transfektsiooni näidatakse siis, kui võõras DNA on väga keerdunud DNA kujul.
Joonis 01: ajutine transfektsioon
Mis on stabiilne transfektsioon?
Stabiilne transfektsioon näitab edukat võõrgeeni integreerumist peremeesgenoomi. Kui võõras DNA siseneb peremeesraku, integreerub osa võõr-DNA-st peremeesgenoomiga ja saab selle osaks. Seega võõrriigi DNA paljuneb ja kandub ka tulevastesse põlvedesse, kui peremeesorganismi genoom kordub. Seda tüüpi transfektsioon on keeruline ja haruldane. Kuid tänu stabiilsele transfektsioonile genoomi püsib see tunnus mitme põlvkonna vältel kauem.
Stabiilne transfektsioon on keeruline protsess, mis nõuab DNA tõhusat toimetamist ja võõra DNA rakkude omandamist selle genoomi. Seega soosib lineaarne DNA stabiilset transfektsiooni kui ümmargune DNA. Kuid stabiilne transfektsioonikiirus on ligikaudu üks 104 transformeeritud rakust. Stabiilset transfektsiooni võib täheldada selekteeritava markeri kotransfomatsiooni teel ja kunstliku selektsiooni abil söötmel.
Joonis 02: Stabiilne transfektsioon
Mis vahe on ajutisel ja stabiilsel transfektsioonil?
Erinev artikkel keskel enne tabelit
Ajutine vs stabiilne transfektsioon |
|
| Võõras DNA ei integreeru peremeesgenoomi. | Võõras DNA integreerub peremeesgenoomiga ja saab selle osaks. |
| Replikatsioon hostis | |
| Ajutiselt transfekteeritud geenid ei paljune peremeesorganismis. Seetõttu ei kandu geenid järgmistele põlvkondadele. | Geenid paljunevad peremehes ja edastatakse tulevastele põlvedele. |
| Geeniekspressiooni kestus | |
| Geenid avalduvad piiratud aja jooksul ja pärast seda need hävitatakse. | Geenid muutuvad genoomi osaks ja väljenduvad põlvkonnas pikka aega. |
| Kasutage | |
| See on kasulik geenide või geeniproduktide lühiajalise ekspressiooni mõju uurimiseks. | See on kasulik geeniekspressioonide pikaajalise mõju uurimiseks. |
| Transfektsiooni tuvastamine | |
| Geenid on ekspresseeritud ja neid saab reportergeeni sisestades hõlpsasti tuvastada. | Stabiilset transfektsiooni saab hõlpsasti tuvastada, sisestades selekteeritava markeri ja valides läbi kunstliku valiku meediumil. |
| Esinemine ja protsess | |
| Ajutine transfektsioon on tavaline ja selle teostamine pole keeruline. | Stabiilne transfektsioon on haruldane ja seda on keeruline teostada. |
| DNA olemus | |
| Ülemäära ülekuumenenud transfektsiooniks sobivad tugevalt ülirullitud DNA. | Lineaarne DNA sobib stabiilseks transfektsiooniks. |
| Rakendused | |
| Seda kasutatakse geenide koputamise või inhibeerivate RNA-dega vaigistamise uurimiseks, valgu tootmiseks väikeses mahus | Seda kasutatakse valgu tootmiseks suuremahulistes, pikaajalisemates farmakoloogilistes uuringutes, geeniteraapias, pikaajalise geneetilise reguleerimise mehhanismide uurimisel |
Kokkuvõte - mööduv vs stabiilne transfektsioon
Mööduvad ja stabiilsed transfektsioonid on kahte tüüpi transfektsioonid, mida näidatakse geeni viimisel viirusepõhiste süsteemide abil eukarüootsetesse rakkudesse. Transformeeritud võõras DNA ei ole transientse transfektsiooni korral peremeesgenoomiga integreeritud, samas kui see integreerub peremeesgenoomiga stabiilses transfektsioonis. Ringikujuliselt keeratud DNA-l on näidatud mööduv transfektsioon, samas kui lineaarne DNA eelistab stabiilset transfektsiooni. See on erinevus mööduva ja stabiilse transfektsiooni vahel. Kuid mööduv transfektsioon on tavalise transfektsiooniga võrreldes tavalisem ja lihtsam. Kuid ühe valimine kahe seast sõltub geenisiirde eesmärgist ja uurimisprojekti kestusest.
