Peamine erinevus - nitrotselluloos vs nailonmembraan
Blottimine on oluline meetod DNA, RNA ja valkude spetsiifiliste järjestuste tuvastamiseks nende segudest molekulaarbioloogias. Selleks kasutatakse membraani, mida nimetatakse blotiks. Blottimismeetodeid on erinevaid, näiteks põhja-, lõuna- ja läänepritsimine. Mittespetsiifilise seondumise ja valede avastuste vältimiseks tuleks blotimisprotsessi jaoks valida sobiv membraan. Nitrotselluloos, nailon ja PVDF on tavaliselt blottimistehnoloogiates kasutatavad membraanid. Neil on erinevad omadused. Peamine erinevus nitrotselluloosi ja nailonmembraani vahel on see, et nitrotselluloosmembraanidel on kõrge valgu immobiliseerimisvõime, samas kui nailonmembraanidel on kõrge nukleiinhappe immobiliseerimisvõime. Mõlemat tüüpi membraane kasutatakse aga blottimistehnikates sageli.
SISUKORD
1. Ülevaade ja peamine erinevus
2. Mis on nitrotselluloosmembraan
3. Mis on
nailonmembraan 4. Kõrvuti võrdlus - nitrotselluloos vs nailonmembraan
5. Kokkuvõte
Mis on nitrotselluloosmembraan?
Nitrotselluloosmembraan on nukleiinhappe ja valgu blotimise meetodites tavaliselt kasutatav membraanfilter. Sellel on suur valkudega seondumise potentsiaal. Seega kasutatakse nitrotselluloosmembraane Western blot tehnikas laialdaselt. Nitrotselluloosmembraanid sobivad kõigi hübridisatsioonimeetoditega ja neil on interferentsideta parem sidumisvõime. Nitrotselluloosmembraanid on loomult hüdrofiilsed. Nad muudavad hüdrofiilse koostoime molekulidega ja immobiliseerivad need tõhusalt membraanile. Kaubanduslikud nitrotselluloosmembraanid on saadaval kahes poorisuuruses: 0,45 ja 0,2 um.
Joonis 01: Nitrotselluloosmembraan, mida kasutatakse Western blotimisel
Mis on nailonmembraan?
Nailonmembraan on teist tüüpi kaubanduslik membraan, mida kasutatakse blottimistehnikas. Seda kasutatakse alternatiivina nitrotselluloosmembraanidega lõuna- ja põhjapoolseks blottimiseks. Nailonmembraanid sobivad ideaalselt lõunapoolseks blottimiseks kui nitrotselluloos, kuna neil on suur afiinsus DNA-ga seondumiseks. Mitmete nailonmembraanide ainulaadsete omaduste tõttu kasutavad teadlased nitrotselluloosmembraani asemel lõuna- ja põhjapoolseks blottimiseks tavaliselt nailonmembraane. Erinevalt nitrotselluloosist on eemaldamiseks ja taastamiseks soovitatav ka nailonmembraane.
Joonis 02: Lõuna-blottimiseks kasutatud nailonmembraan
Mis vahe on nitrotselluloosil ja nailonmembraanil?
Erinev artikkel keskel enne tabelit
Nitrotselluloos vs nailonmembraan |
|
| Nitrotselluloosmembraanid on habras. | Nailonmembraanid on vähem habras. |
| Käitlemine | |
| Neid on raske käsitseda. | Neid on lihtne käsitseda. |
| Uuesti proovimine | |
| Toetamata nitrotselluloosmembraane on raske ümber riietada. | Nailonmembraanide abil on lihtne uuesti töödelda. |
| Ühilduvus erinevate hoiutingimustega | |
| Nitrotselluloosmembraanidel on vähem tugevust, et taluda erinevaid säilitamistingimusi. | Nailonmembraanid reageerivad erinevatele ladustamistingimustele tugevamalt. |
| Kasutage | |
| Vaja on eelvõtmist. | Nailonmembraanide jaoks pole vaja eelvormimist. |
| Hüdrofiilne loodus | |
| Nitrotselluloosmembraanid on oma olemuselt hüdrofiilsed, kuid vähem hüdrofiilsed kui nailonmembraanid. | Nad on oma olemuselt väga hüdrofiilsed. |
| Immobiliseerimise potentsiaal | |
| Nitrotselluloosmembraanidel on vähem afiinsust nukleiinhapete suhtes. Kuid sellel on kõrge afiinsus valkude suhtes. | Nailonmembraanidel on nukleiinhapetega kõrge seondumispotentsiaal kui nitrotselluloosmembraanidel. |
Kokkuvõte - nitrotselluloos vs nailonmembraan
Nitrotselluloos ja nailonmembraanid on spetsiaalsed lehed, mida kasutatakse blottimistehnikas, et reprodutseerida geelil oleva ribamustrit. Need võimaldavad tuvastada segudest konkreetse järjestuse või valgu, immobiliseerides need membraanile. Kui molekulid on membraanile immobiliseerunud, saab seda kasutada märgistatud sondidega hübridisatsioonianalüüsi substraadina. Nitrotselluloosmembraani kasutatakse valgu tuvastamiseks Western blot-tehnikas tavaliselt tänu suurele seondumisafiinsusele valkudega. Nailonmembraane kasutatakse sageli lõuna- ja põhjapoolseks määrimiseks. See on erinevus nitrotselluloosi ja nailonmembraani vahel.
