Peamine erinevus - DNA vs RNA ekstraheerimine
DNA ja RNA uurimine on oluline aspekt molekulaarbioloogia, biotehnoloogia ja geneetika põhimõistete mõistmiseks. Nende uuringute ajal katseprotseduuride läbiviimiseks on vaja puhta DNA ja RNA proovide ekstraheerimist. Peamine erinevus DNA ja RNA ekstraheerimise vahel on see, et DNA ekstraheerimisprotsess puhastab DNA-d, samal ajal kui RNA ekstraheerimine puhastab RNA-d. DNA ekstraheerimisprotsessil on kolm erinevat etappi: rakulüüs ja membraanilipiidide ning -valkude katabolism, kataboliitide klompimine kontsentreeritud soolalahusega ja DNA sadestamine etanooliga. Kolmeastmeline protseduur võib koosneda kahest valikulisest etapist. RNA puhastamisprotsess koosneb neljast erinevast etapist: guaniidiumi tiotsüanaadi lisamine rakkude lüüsimiseks, valgu denaturatsioon, sealhulgas ribonukleaasid,RNA eraldamine kloroformi ja fenooli lisamisega ning sade pesemine etanooliga.
SISU
1. Ülevaade ja peamine erinevus
2. Mis on DNA ekstraheerimine
3. Mis on RNA ekstraheerimine
4. DNA ja RNA ekstraheerimise sarnasused
5. Kõrvuti võrdlus - DNA vs RNA ekstraheerimine tabelina
6. Kokkuvõte
Mis on DNA eraldamine?
DNA ekstraheerimine on füüsikaline ja keemiline protsess, mida kasutatakse proovist DNA puhastamiseks. DNA eraldamine on oluline aspekt molekulaarbioloogia ja kohtuekspertiisi kontekstis. Protsess koosneb kolmest põhietapist. Esialgu tuleks hankida huvipakkuvad rakud. Järgmisena hõlbustatakse raku lüüsi, et purustada rakumembraan, mis avab raku ja paljastab koos DNA-ga ka tsütoplasma. Lipiidide lüüsimiseks rakumembraanist võib kasutada pindaktiivseid aineid või muid detergente, samal ajal kui proteiinid kataboliseerivad olemasolevaid valke. See on valikuline samm. Kui rakk on lüüsitud, hõlbustavad kataboliseeritud molekulide kokkukleepumist kontsentreeritud soolalahused. Sellele järgneb lahuse tsentrifuugimine, mis eraldab prahi tükid DNA-st. Selles etapisdiferentseeritud DNA segatakse rakutsükli jooksul kasutatud reagentide ja sooladega.
Joonis 01: DNA ekstraheerimine
Selle edasiseks puhastamiseks võiks kasutada järgmisi samme. Üks meetod on etanooliga sadestamine, mis hõlmab jääkülma etanooli segamist eraldatud DNA prooviga. DNA ei lahustu alkoholis ja tekitab seeläbi graanuli tänu DNA molekulide liitmisele. Selles protsessis lisatakse naatriumatsetaati, et suurendada ioonitugevuse suurendamise abil sademete määra. Lisaks etanooliga sadestamisprotsessile võib selleks indutseerida ka fenool-kloroformiga ekstraheerimise protsessi. Selles meetodis denatureerib fenool proovis olevaid valke. Pärast tsentrifuugimist jäävad denatureeritud valgud orgaanilisse faasi, kloroformiga segatud DNA molekulid aga vesifaasis. Kloroform eemaldab fenoolijäägid. Kui ekstraheerimine on lõpule jõudnud,DNA hoitakse lahustatuna TE puhvris või ülipuhtas vees.
Mis on RNA ekstraheerimine?
RNA puhastamine on protsess, mille käigus RNA puhastatakse bioloogilisest proovist. Ribonukleaasi olemasolu tõttu rakkudes ja kudedes on see protsess keeruline. Ribonukleaasi ensüümil on võime RNA-d kiiresti lagundada. Ribonukleaaside keemiline olemus on äärmiselt stabiilne ja neid on raske inaktiveerida. Ribonukleaaside neutraliseerimine on üks võimalus. Kuna see ensüüm on rakkudes ja kudedes üldlevinud, töötatakse RNA ekstraheerimiseks välja spetsiaalsed tehnikad. Paljudest meetoditest on levinud meetod guanidiiniumtiotsünaadi-fenooli ja kloroformi ekstraheerimine.
Joonis 02: RNA ekstraheerimine
Guanidiiniumtiotsünaadi-fenooli ja kloroformi ekstraheerimismeetod sõltub tsentrifuugimisest ja faaside eraldamisest. Tsentrifuugitav segu koosneb vesiproovist ja veega küllastunud lahusest, mis koosneb fenoolist ja kloroformist. Pärast tsentrifuugimist koosneb lahus ülemisest vesifaasist ja alumisest orgaanilisest faasist neutraalsetes pH-tingimustes (pH 7-8). RNA on vesifaasis. Orgaaniline faas koosneb tavaliselt fenoolis lahustatud valkudest ja kloroformis lahustatud lipiididest. Lisatakse kaotroopne aine (molekul, millel on võime lõhustada veemolekulide vahelisi vesiniksidemeid); seda tuntakse kui guanidiiniumtiotsüanaati. Sellel ainel on võime denatureerida valke, mis sisaldavad ribonukleaase, mis võivad RNA-d lagundada ja osalevad rakkude lüüsis. Samuti eraldab see rRNA ribosomaalsetest valkudest. RNA puhastamise viimane etapp on vesifaasi sadestumise pesemine etanooliga. RNA-d sai puhastada ka vedela lämmastiku abil.
Millised on DNA ja RNA ekstraheerimise sarnasused?
- Mõlemas ekstraheerimisprotsessis kasutatakse kahjulikke kemikaale nagu fenool ja kloroform.
- Tsentrifuugimine on mõlema protsessi jaoks hädavajalik tehnika.
- Etanooli kasutatakse sademe pesemiseks ja puhastatud DNA või RNA saamiseks.
Mis vahe on DNA ja RNA ekstraheerimisel?
Erinev artikkel keskel enne tabelit
DNA vs RNA ekstraheerimine |
|
| DNA ekstraheerimine on protsess, mis eraldab DNA organismist või proovist. | RNA ekstraheerimine on protsess, mis ekstraheerib RNA proovist. |
| Sammud | |
| DNA eraldamise protsess koosneb kolmest erinevast etapist koos kahe valikulise etapiga. | RNA ekstraheerimisprotsess koosneb neljast erinevast etapist. |
| Reaktiivid | |
| DNA ekstraheerimiseks kasutatakse pindaktiivseid aineid, proteaase (valikuline), alkoholi, kloroformi, fenooli, naatriumatsetaati. | RNA ekstraheerimiseks kasutatakse guaniidiumi tiotsüanaati, kloroformi, fenooli ja etanooli. |
Kokkuvõte - DNA vs RNA ekstraheerimine
DNA ja RNA ekstraheerimine on molekulaarbioloogia, geneetika ja biotehnoloogia uurimise katseprotseduuride oluline osa. Mõlemad protsessid hõlmavad sarnaseid reaktiive, kuid RNA ekstraheerimisel kasutatakse spetsiaalset reagenti, mida nimetatakse guaniidiumtiotsüanaadiks, mis vähendab ribonukleaaside aktiivsust. See on peamine erinevus DNA ja RNA ekstraheerimise vahel.
Laadige alla DNA ja RNA ekstraheerimise PDF-versioon
Selle artikli PDF-versiooni saate alla laadida ja kasutada võrguühenduseta eesmärkidel, nagu tsiteeritud. Laadige siit alla PDF-versioon. Erinevus DNA ja RNA ekstraheerimise vahel
