Bensonaasi Ja DNaasi Erinevus

2024 Autor: Mildred Bawerman | [email protected]. Viimati modifitseeritud: 2023-12-16 08:38

Peamine erinevus - bensonaas vs DNaas

Nukleiinhapete lagundamine on oluline paljude molekulaarbioloogia tehnikate jaoks. Seda kasutatakse laialdaselt rekombinantse DNA tehnoloogias soovimatutest DNA ja RNA fragmentidest vabanemiseks. Nukleiinhappeid lagundavaid ensüüme nimetatakse nukleaasideks ja need võivad vajaliku funktsiooni alusel olla erinevat tüüpi. DNA lagundavad nukleaasid on tuntud kui DNaasid, samas kui need, mis lagundavad RNA-d, on tuntud RNaasid. Neid ensüüme kasutatakse enamasti in vitro katsetes, kus puhta DNA, RNA või valkude eraldamiseks viiakse läbi in vitro molekulaarseid katseid. Bensonaasid on teatud tüüpi nukleaasid, mis lagundavad nii DNA-d kui RNA-d, samas kui DNaasid lagundavad ainult DNA-d. See on peamine erinevus bensonaasi ja DNaasi vahel.

SISU

1. Ülevaade ja peamine erinevus

2. Mis on bensonaas

3. Mis on DNaas

4. Bensonaasi ja DNaasi sarnasused

5. Kõrvuti võrdlus - bensonaas vs DNaas tabelina

6. Kokkuvõte

Mis on bensonaas?

Bensonaas on Serratia marcescensist pärinev geneetiliselt muundatud endonukleaas. Seda ensüümi toodetakse E. coli peremeesorganismides tööstuslikus ulatuses. Bensonaas on võimeline lõhustama kaheahelalise DNA, lineaarse DNA, ümmarguse DNA ja üheahelalise RNA. Seega on bensonaas kaubanduslikult oluline. Bensonaasi ensüüm on valgudimeer, millel on 245 identset aminohapet, ~ 30 kDa alaühikud, millel on kaks olulist disulfiidsidet. Bensonaas lõhustab nukleiinhapped selle 5'-otsast ja annab fragmente, millel on vabad 5'-otsad. Bensonaas võib lõhustada nukleiinhappeid ükskõik millises järjestuses, kuid eelistab GC rikkaid piirkondi.

Bensonaasi hoitakse -20 ^° C juures. Leitakse, et ensüümi aktiivsuse optimaalne pH on 8,0–9,2. Bensonaasi rakendused hõlmavad proovi ettevalmistamist valgu 2D geeli elektroforeesiks, kus bensonaas eemaldab seotud nukleiinhapped ja nukleiinhappe saasteainete eemaldamise rekombinantsetest valgu preparaatidest. Seda kasutatakse ka valguekstraktide viskoossuse vähendamiseks ja rakkude kokkukleepumise vältimiseks rakusegus.

Mis on DNase?

DNaas on nukleaas, hüdrolüütiline ensüüm, mis on võimeline lõhustama ainult kaheahelalise DNA. DNaase on kahte peamist tüüpi: DNaas I ja DNaas II. DNaas I osaleb kaheahelalise DNA lõhustamises 5'-vaba otsaga polünukleotiidide saamiseks. DNaas II osaleb kaheahelalise DNA lõhustamises, et saada 3 'vaba otsa või üleulatuvate polünukleotiidahelasid.

DNaas I

DNaas I toimib optimaalse pH juures vahemikus 7,0–8,0. Ensüümi aktiivsus sõltub paljudest ioonilistest kofaktoritest, sealhulgas Ca2 ⁺, Mg2 ⁺ või Mn2 ⁺. Mg ²⁺ ja Mn ²⁺ aktiivsus otsustab DNaasi I funktsiooni. Mg ²⁺ juuresolekul lõhustab DNaas I dsDNA iga ahela iseseisvalt. See toimub juhuslikult. Seevastu Mn ²⁺ juuresolekul lõikab ensüüm mõlemad DNA ahelad ligikaudu samas kohas. Selle lõhustamise tulemuseks on kahte tüüpi DNA fragmentide tootmine; ühte tüüpi nüri otstega ja teist tüüpi ühe või kahe nukleotiidi ülerippudega.

Joonis 02: DNaas

DNaas II

DNaas II toimib optimaalse pH taseme 4,5–5,0 juures ja selle aktiivsuseks on vaja kahevalentseid metalliioone, sarnaselt DNaas I-le. Teadaolevalt koosneb DNaas II mehhanism kolmest põhietapist.

1. DNA selgroos tekitatakse mitu ühe ahelaga purunemist.
2. Toodetakse happes lahustuvaid nukleotiide ja oligonukleotiide.
3. Mittelineaarne hüperkroomne nihe toimub viimases faasis.

DNaasi ensüümi peamisteks inhibiitoriteks on metallkelaatorid, siirdemetallid ja kemikaalid nagu naatriumdodetsüülsulfaat ja β-merkaptoetanool.

DNaasi peamised rakendused hõlmavad DNA-vaba RNA ekstraktide ja valguekstraktide valmistamist ning matriitsi DNA eemaldamist in vitro transkriptsioonikatsete käigus.

Millised on bensonaasi ja DNaasi sarnasused?

• Mõlemad on hüdrolüütilised ensüümid.
• Mõlemad on nukleaasid.
• Mõlemad osalevad nukleiinhapete fosfodiestersidemete lõhustamisel.
• Mõlemad nõuavad ensüümi aktiivsuse säilitamiseks optimaalset pH-d ja säilitustemperatuuri.
• Ensüümide inhibiitorite hulka kuuluvad kelaativad ained, siirdemetallid ja detergentide kemikaalid.
• Rakendused on peamiselt suunatud DNA, RNA ja valkude kõrge puhtusega ekstraktide saamiseks.
• Mõlemat ensüümi saab toota geenitehnoloogia abil.

Mis vahe on bensonaasil ja DNaasil?

Erinev artikkel keskel enne tabelit

Bensonaas vs DNaas
Bensonaas on ensüüm, mis on võimeline lõhustama kaheahelalise DNA, lineaarse DNA, ümmarguse DNA ja RNA.	DNaas on ensüüm, mis on võimeline lõhustama kaheahelalise DNA.
Ensüümi substraat
Nii DNA kui ka RNA on bensonaasi substraadid.	DNA on DNaasi substraat.
Struktuur
Bensonaasi optimaalne pH vahemik on 7,0–8,0	DNaasi I optimaalsed pH-vahemikud on 7,0–8,0 ja DNaas II 4,5–5,0.

Kokkuvõte - bensonaas vs DNaas

Nukleaasi ensüüme kasutatakse molekulaarbioloogia ja geenitehnoloogia osas erinevates katseprotseduurides laialdaselt. Bensonaas ja DNaas on kahte tüüpi nukleaase. Bensonaas osaleb nii DNA kui RNA lagundamises, samas kui DNaas osaleb kaheahelalise DNA lõhustamises. See on põhiline erinevus bensonaasi ja DNaasi vahel. Praegu toodetakse neid nukleaasitüüpe rekombinantse DNA tehnoloogia abil, mis annab maksimaalse tootmise jaoks optimeeritud kõrgema kvaliteediga ensüümid.

Laadige alla benzonase vs DNase PDF-versioon

Selle artikli PDF-versiooni saate alla laadida ja kasutada võrguühenduseta eesmärkidel, nagu tsiteeritud. Laadige siit alla PDF-versioon Bensonaasi ja DNaasi vahe