Peamine erinevus - otsene vs kaudne ELISA
Ensüümidega seotud immuunanalüüs (ELISA), mida nimetatakse ka ensüümi immuunanalüüsiks, on seroloogiline test, mis tuvastab veres antikehad. Seda kasutatakse diagnostilise vahendina, et teada saada, kas patsient on kokku puutunud teatud tüüpi viiruse või mõne muu nakkusohtliku ainega (antigeen) ja kas organism on nakkuse vastu tootnud antikehi. ELISA võimaldab tuvastada ka varasemaid ja praeguseid nakkusi. Seetõttu kasutavad arstid enne haiguste põhjalikku analüüsimist sageli ELISA-d eelvaliku testina. Seda testi saab teha laboris, võttes patsiendilt vereproovi. ELISA testi on kahte tüüpi: otsene ELISA ja kaudne ELISA. Peamine erinevus otsese ja kaudse ELISA vahel on see, et kaudne ELISA on tundlikum ja nõuab sekundaarse antikeha lisamist, samas kui otsene ELISA on vähem tundlik ja kasutab ainult esmast antikeha.
SISU
1. Ülevaade ja peamine erinevus
2. Mis on otsene ELISA
3. Mis on kaudne ELISA
4. Kõrvuti võrdlus - otsene vs kaudne ELISA
5. Kokkuvõte
Mis on otsene ELISA?
ELISA on haigusdiagnostiline test, mis tehakse teatud antigeenide või antikehade olemasolu tuvastamiseks veres. Seda tehakse plaatanalüüsina. See kasutab antikehi, mis on seotud kergesti analüüsitavate ensüümidega. Antigeenide olemasolu seerumiproovis seondub ensüümidega seotud spetsiifiliste antikehadega. Viimases etapis lisatakse ensüümiga reageerimiseks spetsiifiline substraat. Ensüüm muudab substraadi värviliseks või signaali tootvaks tooteks. Keemilise substraadi värvimuutus näitab konkreetse antikeha olemasolu seerumiproovis. Otseses ELISA testis kasutatakse ainult ensüümiga seotud esmaseid antikehi. Antigeeniga seondudes muudab see kiiresti värvi, mis näitab nakkusetekitaja olemasolu veres. Kuid,signaalide intensiivsus on otseses ELISA-s nõrgem, kuna epitoobid piirduvad antigeenide seondumisega. Seega on otsene ELISA võrreldes kaudse ELISA-ga vähem tundlik.
Joonis 01: Otsene ELISA test
Mis on kaudne ELISA?
ELISA võib läbi viia kahte tüüpi antikehade abil, nimelt; esmane antikeha ja sekundaarne antikeha. Kaudse ELISA tööriist kasutab signaalide võimendamiseks parema tuvastamise eesmärgil mõlemat tüüpi antikehi. Kaudne ELISA tehnika viiakse läbi järgmiselt.
- Plaate inkubeeritakse antigeenidega ja pestakse mittespetsiifilise seondumise blokeerimiseks.
- Seejärel lisatakse primaarsed antikehad ja pestakse.
- Lisatakse ensüümiga seotud sekundaarne antikeha ja pestakse.
- Lisatakse substraat ja lastakse reageerida ensüümidega.
- Tuvastatakse signaalid ja tuvastatakse spetsiifilise antigeeni olemasolu või puudumine proovis.
Kaudses ELISA testis võivad mitu primaarset antikeha seonduda mitmed sekundaarsed antikehad. Sekundaarsed antikehad on seotud kergesti analüüsitavate ensüümidega. Seetõttu võib üks seondumine anda rohkem kui ühe interaktsiooni tõttu tugeva signaali. Seega on kaudne ELISA tundlikum kui otsene ELISA. Kuid kaudne ELISA võib sekundaarsete antikehade ristreaktsioonide tõttu anda mittespetsiifilisi signaale.
Joonis 02: kaudne ELISA test
Mis vahe on otsesel ja kaudsel ELISA-l?
Erinev artikkel keskel enne tabelit
Otsene vs kaudne ELISA |
|
| Otsene ELISA on kaudse ELISA-ga võrreldes vähem tundlik. | Kaudne ELISA on tundlikum. |
| Võetud aeg | |
| Otsene ELISA test on kiire protsess. | Kaudne ELISA on aeganõudev. |
| Antikehade kasutamine | |
| Otseses ELISA-s kasutatakse ainult ühte tüüpi antikehi (primaarseid antikehi). | Kaudse ELISA jaoks kasutatakse primaarseid ja sekundaarseid antikehi. |
| Seos ensüümidega | |
| Primaarsed antikehad on seotud ensüümidega. | Sekundaarsed antikehad on seotud ensüümidega. |
| Teiste antikehade ristreaktiivsus | |
| Otsene ELISA välistab teiste antikehade ristreaktiivsuse. | Kaudset ELISA-d mõjutab teiste antikehade ristreaktsioon. |
| Signaalid | |
| Signaalid on kaudse ELISA-ga võrreldes nõrgad. | Signaale võimendatakse kaudse ELISA meetodil. Seega on seda lihtne tuvastada. |
Kokkuvõte - otsene vs kaudne ELISA
ELISA on biokeemiline tehnika, mida kasutatakse peamiselt immunoloogias antikeha või antigeeni olemasolu tuvastamiseks patsiendi vereproovis. Seda saab läbi viia kahe otsese või kaudse ELISA meetodina. Otseses ELISA testis kasutatakse antigeeni tuvastamiseks ainult esmaseid antikehi, samas kui kaudses ELISA testis kasutatakse nii esmaseid kui ka sekundaarseid antikehi. Otsese ELISA korral märgistatakse primaarseid antikehi, kaudses ELISA-s aga sekundaarseid antikehi. See on erinevus otsese ja kaudse ELISA vahel.
