Peamine erinevus - soe vs külm trüpsiinimine
Soe ja külm trüpsiinimine on kaks meetodit, mida kasutatakse rakkude ensümaatiliseks lagundamiseks loomarakkude kultiveerimisel. Peamine erinevus sooja ja külma trüpsiinimise vahel, nagu nimedki ütlevad, sõltub temperatuurist, mille juures trüpsiin raku lagundamiseks lisatakse. Soe trüpsiinimine toimub kõrgematel temperatuuridel (36,5 - 37 0 C), külm trüpsiinimine aga madalatel temperatuuridel.
Loomsete rakkude primaarse kultiveerimise protsessis kasutatakse kolme peamist meetodit, mis on osutunud edukaks. Need kolm meetodit hõlmavad rakkude mehaanilist lagundamist, rakkude ensümaatilist lagundamist ja esmast eksplanteerimistehnikat. Rakkude ensümaatiline lagundamine, mis viib rakkude isoleerimiseni, ja seda teeb valke lagundav ensüüm trüpsiin. Seetõttu on see protsess tuntud kui trüpsiinimine. Trüpsiinimist saab teha kahes erinevas tingimustes, nimelt soe trüpsiinimine ja külmtrüpsiinimine. Soe trüpsiinimine on meetod rakkude töötlemiseks trüpsiiniga soojades tingimustes temperatuuril 36,5–37 0C. Külmtrüpsiinimine on trüpsiiniga töötlemise protsess, mis toimub külmemates tingimustes, eelistatult jääl, hoides väga madalat temperatuuri.
SISU
1. Ülevaade ja
põhierinevus 2. Mis on soe trüpsiinimine
3. Mis on külmtrüpsiinimine
4. Sooja ja külma trüpsiinimise sarnasused
5. Kõrvuti võrdlus - soe vs külmtrüpsiinimine tabelina
6. Kokkuvõte
Mis on soe trüpsiinimine?
Trüpsiinimist saab teha rakukomponentide lagundamiseks, et rakud isoleerida primaarse rakukultuuri saamiseks. Trüpsiin on valgu lagundamise ensüüm ja trüpsiinimisel kasutatav ensüümisegu võib olla kas toorekstrakt või puhastatud toode. Toorekstrakt on väidetavalt efektiivsem valkude lüüsimisel ja rakkude lagunemisel, kuna see sisaldab muid lagundavaid ensüüme.
Soe trüpsiinimine on kõige sagedamini kasutatav ensümaatiline meetod rakkude lagundamiseks, mis toimub kõrgematel temperatuuritingimustel. Enne trüpsiiniga töötlemist hakitakse soovitud kude väiksemateks tükkideks. See hõlbustab hõlpsat jaotamisprotsessi. Tükeldatud kude pestakse seejärel spetsiaalses söötmes, mida nimetatakse Dissection Basal Salt söötmeks.
Pärast pesemisetapi lõppu transformeeritakse rakud kolbi, mis sisaldab aktiivset ensüümi, milleks on trüpsiin. Kuna see tehnika eeldab sooja trüpsiinimisprotokolli, asetatakse trüpsiin umbes neljaks tunniks temperatuurile umbes 37 ° C.
Joonis 01: trüpsiin
Sisu segatakse ja segatakse tsentrifuugimismeetodite abil protokolli hõlbustamiseks ja lagundamisprotsessi kiirendamiseks. Kui soovitatud aeg on saavutatud, saab rakud tuletada supernatandist. Seejärel inkubeeritakse supernatandist saadud rakke kindlal temperatuuril ja kellaajal.
Mis on külmtrüpsiinimine?
Külm trüpsiinimine on teist tüüpi trüpsiinimine, mis toimub külmades tingimustes. Selles tehnikas pannakse tükeldatud ja pestud rakud viaali jääle ja seejärel leotatakse trüpsiiniga. Leotamise periood on palju pikem - umbes 6 - 24 tundi.
Pärast leotamisprotseduuri lõpetamist eemaldatakse trüpsiin rakulüsaadist ja koetükke inkubeeritakse täiendavalt temperatuuril 37 ° C umbes 20-30 minutit. Rakkude lagunemine toimub koesegu korduva pipeteerimisega. See võimaldab rakkudel membraanist eralduda ja jõuda supernatanti. Kui rakud on supernatandis, inkubeeritakse ja kasvatatakse neid soovitud temperatuuril ja ajaperioodil.
Külma trüpsiinimise meetodil on mitmeid eeliseid
- Elujõuliste rakkude suurem saagis, kuna rakukahjustused on viidud miinimumini. Rakukahjustused minimeeritakse, kui tsentrifuugimisetappe ei kasutata.
- Väga mugav meetod.
- Vähem töömahukas.
Külma trüpsiinimise meetodi peamine piirang on see, et suuri koguseid ei saa ühel juhul kasutada.
Millised on sooja ja külma trüpsiniseerimise sarnasused?
- Nii soojas kui ka külmas trüpsiinimisprotsessis kasutatakse rakkude lagundamiseks ensüümi trüpsiini.
- Rakukultuuriprotseduurides kasutatakse rakkude lagundamiseks nii sooja kui ka külma trüpsiini protsessi.
- Nii sooja kui ka külma trüpsiiniga töötlemise protseduurides on rakud saadud supernatandist.
Mis vahe on sooja ja külma trüpsiniseerimise vahel?
Erinev artikkel keskel enne tabelit
Soe vs külm trüpsiinimine |
|
| Soe trüpsinisatsiooniga on ravimeetodi rakud trüpsiiniga soojades tingimustes temperatuuril 36,5-37 0. | Külmtrüpsiinimine on trüpsiiniga töötlemise protsess, mis toimub külmemates tingimustes, eelistatavalt jääl, hoides väga madalat temperatuuri. |
| Protokoll | |
| Tükeldatud koetükke hoitakse kogu protseduuri vältel pidevalt temperatuuril 37 ° C. | Tükeldatud koetükke hoitakse esialgu jääkülmas temperatuuril ja seejärel 37 ° C juures. |
| Temperatuur | |
| Soe trüpsiinimine toimub temperatuuril 36,5 - 37 0 | Külm trüpsiinimine toimub jääkülmas temperatuuril. |
| Kulutatud aeg | |
| Vähem aega, mis on vajalik kogu trüpsiinistamise protsessiks (umbes 4 tundi). | Külma trüpsiinimise jaoks on vaja kauem aega (umbes 6–24 tundi). |
| Elujõuliste rakkude saagis | |
| Vähe sooja trüpsiinimist. | Kõrge külma trüpsiiniga. |
| Tsentrifuugimise kasutamine | |
| Rakkude lagundamiseks soojas trüpsiinimisel on vaja tsentrifuugimist. | Külma trüpsiniseerimise korral ei ole vaja tsentrifuugimist. |
| Esialgne koekogus trüpsiinimiseks | |
| Soojas trüpsiinimisel võib kasutada suuremat kogust kudesid. | Külmas trüpsiinimisel võib kasutada väiksemat kogust kudesid. |
| Rakkude kahjustused | |
| Suur tänu tsentrifuugimisele soojas trüpsiinimisel. | Külma trüpsiinimise tõttu vähem. |
Kokkuvõte - soe vs külm trüpsiinimine
Trüpsiinistamine on meetod, mille abil valke lagundav ensüüm trüpsiin kasutatakse rakkude kultiveerimise käigus primaarsete rakukultuuride lagundamiseks ja valmistamiseks. Trüpsiinimisel on kaks peamist tehnikat, mis põhinevad protseduuri ajal kasutatud temperatuuridel. Need on soojad ja külmad trüpsiinid. Soe trüpsiinimine viiakse läbi temperatuuril 37 ° C, külm trüpsiinimine aga jääkülmades tingimustes. Ehkki külma trüpsiinimise lõpuleviimine võtab kauem aega, on selle elujõuliste rakkude saagikus väidetavalt suurem. Selle põhjuseks on asjaolu, et külma trüpsiinimisega vähendatakse rakukahjustusi miinimumini, kuna see ei kasuta jõulisi tsentrifuugimisetappe. See on erinevus sooja ja külma trüpsiinimise vahel.
