Peamine erinevus - olukorras hübridiseerimine vs immunohistokeemia
Vähi ja nakkushaiguste diagnostika on populaarne suundumus, kus uudseid proteoomikal ja genoomikal põhinevaid tehnikaid kasutatakse kasvajate või nakkuslike rakkude, nende leviku ja rakkude arengukohtade tuvastamiseks ning enamiku nakkushaiguste ja mittenakkuslike haiguste geneetilise aluse analüüsimiseks. Selle tulemuseks on ravimite täpne töötlemine ja kavandamine ning haiguste kohandatud ravimeetodite väljatöötamine. In situ hübridisatsioon (ISH) ja immunohistokeemia (IHC) on kaks nii laialdaselt kasutatavat meetodit vähi bioloogias ning peamine erinevus in situ hübridisatsiooni ja immunokeemia vahel seisneb analüüsiprotseduurides kasutatavates molekulides. ISH-s kasutatakse analüüsis nukleiinhappe sonde, samas kui IHC-s kasutatakse diagnostilisteks määramisteks monoklonaalseid ja polüklonaalseid antikehi.
SISU
1. Ülevaade ja peamine erinevus
2. Mis on hübridiseerimine olukorras
3. Mis on immunohistokeemia
4. Sarnasused olukorra hübridisatsiooni ja immunohistokeemia vahel
5. Kõrvuti võrdlus - kohapealne hübridisatsioon vs immunohistokeemia tabelina
6. Kokkuvõte
Mis on olukorras hübridiseerimine (ISH)?
In situ hübridisatsioon on nukleiinhapete hübridisatsioonitehnik, mis viiakse läbi otse koe osale või lõigule, kogu koesse või rakkudesse. Tehnika sõltub Watson Cricki komplementaarse aluse paaristamise teooriast, mille tulemuseks on kas DNA-DNA hübriidid või DNA-RNA hübriidid, mis suudavad tuvastada muteerunud geene või tuvastada vajaliku huvipakkuva geeni. Hübridiseerimistehnika käigus kasutatakse sondidena üheahelalisi DNA-järjestusi, kaheahelalisi DNA-järjestusi, üheahelalisi RNA-järjestusi või sünteetilisi oligonukleotiidijärjestusi ja need sondid märgistatakse autoradiograafias identifitseerimisprotseduuride jaoks radioaktiivse fosforiga selle 5 'otsas või märgistatakse fluorestsentsvärvidega.. Saadaval on erinevaid ISH-tehnikaid, lähtudes kasutatud sondi tüübist ja järgitavast visualiseerimistehnika tüübist.
Joonis 01: Fluorestseeruv hübridisatsioon olukorras
ISH on palju rakendusi, peamiselt nakkushaiguste molekulaardiagnostikas, et tuvastada patogeene ja kinnitada patogeeni molekulaarse diagnostika abil. Seda kasutatakse ka arengubioloogia, karüotüüpimise ja fülogeneetilise analüüsi ning kromosoomide füüsilise kaardistamise valdkonnas.
Mis on immunohistokeemia (IHC)?
IHC tehnikas on peamine analüüsitav molekul antigeen. IHC ajal kasutatakse antigeenide olemasolu kindlakstegemiseks infektsiooni või pahaloomulise rakkude proliferatsiooni staatuse korral monoklonaalseid ja polüklonaalseid antikehi. Tehnika põhineb antigeeni ja antikeha seondumisel ning selle tehnika jaoks kasutatakse ensüümimärke; üks selline rakendus on ELISA (ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs). Markerid võivad olla ka fluorestsentsmärgistatud antikehad või raadiomärgistatud antikehad.
Joonis 02: immunohistokeemia
IHC-d kasutatakse vähirakkude avastamiseks laialdaselt. Diagnostilised protseduurid on suunatud kasvajarakkudes leiduvatele antigeenidele kasvaja tuvastamiseks ja iseloomustamiseks. Nakkusetekitajate diagnoosimiseks kasutatakse sama protseduuri. Monoklonaalseid ja polüklonaalseid antikehi kasutatakse ka erinevate geeniproduktide analüüsimiseks, võimaldades antikeha-antigeeni siduva reaktsiooni soovitud valgu ja manustatud sünteetilise antikeha vahel.
Millised on sarnasused olukorras hübridisatsiooni ja immunohistokeemia vahel?
- ISH ja IHC on väga spetsiifilised reaktsioonid.
- Mõlemad võtted on ülitäpsed.
- Mõlemat tehnikat saab kasutada vähi ja nakkushaiguste diagnostikas.
- Need meetodid viiakse läbi steriilsetes in vitro keskkondades.
- Mõlemad on kiired meetodid, mis annavad reprodutseeritavaid tulemusi.
- ISH ja IHC kasutavad detekteerimismeetodeid, näiteks raadiosildistamist ja fluorestsentstehnikat.
Mis vahe on hübridisatsiooni olukorras ja immunohistokeemia vahel?
Erinev artikkel keskel enne tabelit
In situ hübridisatsioon vs immunohistokeemia |
|
| ISH on nukleiinhapete hübridisatsioonimeetod, mis viiakse läbi otse koe osale või lõigule või kogu koele. | IHC on tehnika, kus antigeenide olemasolu kindlakstegemiseks kasutatakse monoklonaalseid ja polüklonaalseid antikehi, mis on rakupindadele asetatud spetsiaalsed valgumarkerid. |
| Analüüsitud biomolekulide tüüp | |
| ISH analüüsib nukleiinhappeid. | IHC analüüsib valke-antigeene. |
| Biokeemilise reaktsiooni alus | |
| Selles meetodis toimub täiendav aluse paaristamine DNA-DNA või DNA-RNA vahel. | Antigeeni ja antikeha koostoimed on seotud immunohistokeemias. |
| Ensüümidega seotud tuvastamismeetodid | |
| Ensüümidega seotud tuvastamismeetodeid ei saa ISH-s kasutada. | Ensüümidega seotud detekteerimismeetodeid saab kasutada IHC-s. |
Kokkuvõte - kohapealne hübridiseerimine vs immunohistokeemia
Molekulaarne diagnostika on kiired ja kinnitavad meetodid, mida saab kasutada nakkushaiguse, nagu vähk või nakkushaigus, näiteks HIV või tuberkuloos, tuvastamiseks rakkudes esinevate molekulaarsete markerite põhjal, mis viivad haiguse ilmnemiseni. Molekulaarsed markerid võivad esineda ekspresseeritud valkude kujul või geneetilisel tasemel, mille põhjal võetakse kasutusele tõhususe suurendamiseks erinevad uudsed tehnikad ja mis on vähem töömahukad, ehkki nende meetoditega kaasnevad suured kulud. Seega sõltub ISH DNA-DNA või DNA-RNA hübriidi moodustumisest ja IHC antikeha ja antigeeni spetsiifilistest reaktsioonidest. See on erinevus in situ hübridiseerimise vahel.
Laadige alla hübriidimise kohapeal vs immunohistokeemia PDF-versioon
Selle artikli PDF-versiooni saate alla laadida ja kasutada võrguühenduseta eesmärkidel, nagu tsiteeritud. Laadige siit alla PDF-versioon. Erinevus hübridiseerumise ja immunohistokeemia vahel.
