Peamine erinevus - immunofluorestsents vs immunohistokeemia
Haiguste diagnostikast, milles kasutatakse molekulaarbioloogilisi meetodeid, on saanud kliinilise laboratooriumi tehnoloogia esilekerkiv ala. See sisaldab kõiki katseid ja meetodeid haiguse tuvastamiseks ja haiguse põhjuste mõistmiseks, analüüsides organismis DNA, RNA või ekspresseeritud valke. Molekulaarse diagnostika kiire areng on võimaldanud nakkushaiguste alusuuringuid. Neid kasutatakse haigusega seotud oluliste geenide või valkude järjestuse või ekspressioonitaseme muutuste määramiseks. Immunofluorestsents (IF) ja immunohistokeemia (IHC) on kaks nii laialdaselt kasutatavat meetodit vähi bioloogias. IF on IHC tüüp, kus monoklonaalsete ja polüklonaalsete antikehade analüüsimiseks kasutatakse fluorestsentsi tuvastamise meetodit, samas kui IHC kasutab monoklonaalsete ja polüklonaalsete antikehade tuvastamiseks keemial põhinevaid meetodeid. See on IF ja IHC peamine erinevus.
SISU
1. Ülevaade ja peamine erinevus
2. Mis on immunofluorestsents
3. Mis on immunohistokeemia
4. Immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia sarnasused
5. Kõrvuti võrdlus - immunofluorestsents vs immunohistokeemia tabelina
6. Kokkuvõte
Mis on immunofluorestsents (IF)?
Immunofluorestsents on tuvastamismeetod, kus testis kasutatud antikehad märgistatakse avastamise eesmärgil fluorestsentsvärvide või fluorestseeruvate valkude abil. Märgistatud sekundaarsed antikehad võivad põhjustada soovimatuid taustsignaale; seetõttu põhineb IF-tehnika praegu primaarse antikeha enda märgistamisel, et vältida soovimatuid signaale avastamise ajal. Selle tehnika abil välditakse primaarse ja sekundaarse antikeha mittespetsiifilist seondumist ning see on kiirem, kuna sekundaarset inkubatsioonietappi pole. Samuti paraneb andmete kvaliteet.
Joonis 01: Topeltimmunofluorestsentsvärvimine BrdU, NeuN ja GFAP jaoks
Fluorokroomid või fluorestseerivad värvid on ühendid, mis suudavad neelata kiirgust, eelistatavalt ergastatavat ultraviolettkiirgust. Kui osakesed jõuavad ergastatud olekust põhiseisundini, kiirgavad nad kiirgust, mille detektor püüab ja tuvastab spektri moodustamiseks. On väga oluline, et fluorestsentsmärgis oleks konkreetse reaktsiooni jaoks ühilduv ja stabiilne ning täpsete tulemuste saamiseks peaks see olema antikehaga korralikult konjugeeritud. Üks enimkasutatavaid fluorokroome on fluorestseiini isotiotsüanaat (FITC), mis on rohelist värvi, absorptsiooni ja emissiooni tipplainepikkustega vastavalt 490 nm ja 520 nm. Rhodamiin, teine IF-s kasutatav toimeaine, on punast värvi ja sellel on erinevad neeldumis- ja emissioonipiiri lainepikkused 553 nm ja 627 nm.
Mis on immunohistokeemia (IHC)?
IHC on molekulaarne testimismeetod, mida kasutatakse antigeeni olemasolu tuvastamiseks ja kinnitamiseks märklaudrakus. Sihtrakk võib olla nakkav osake, mikroobne patogeen või pahaloomuline kasvajarakk. IHC kasutab monoklonaalseid ja polüklonaalseid antikehi, et määrata kindlaks sihtrakkude rakupinnal esinevad antigeenid. Tehnika põhineb antigeeni ja antikeha seondumisel. Nende antikehadega konjugeeritakse detekteerimismarker, et tuvastada konkreetse antigeeni olemasolu või puudumine. Need markerid võivad olla keemilised markerid, näiteks ensüümid, fluorestseeruvalt märgistatud antikehad või raadiomärgistatud antikehad.
Joonis 02: Hiire-aju viil värviti immunohistokeemia abil
Kõige populaarsem on IHC rakendus vähirakkude bioloogias pahaloomuliste kasvajate esinemise tuvastamiseks, kuid seda kasutatakse ka nakkushaiguste tuvastamiseks.
Millised on immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia sarnasused?
- Immunofluorestsents ja immunohistokeemia toimuvad in vitro tingimustes.
- Mõlemad meetodid põhinevad antigeen-antikehal
- Mõlemad on väga kiired tehnikad.
- Meetodite tulemused on taasesitatavad.
- Mõlemal on andmete kvaliteet paranenud.
- Neid tehnikaid kasutatakse vähi ja nakkushaiguste diagnostikas.
Mis vahe on immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia vahel?
Erinev artikkel keskel enne tabelit
Immunofluorestsents vs immunohistokeemia |
|
| IF on avastamismeetod, kus testis kasutatud antikehad märgistatakse, kasutades avastamiseks fluorestsentsvärve või fluorestseeruvaid valke. | IHC on detekteerimistehnika, kus testis kasutatud antikehad märgistatakse avastamiseks kemikaalide või radioaktiivsete elementidega. |
| Täpsus | |
| IF-tehnikas on täpsus kõrgem kui IHC-s. | Täpsus on IHC-s väiksem. |
| Konkreetsus | |
| IF on konkreetsem. | IHC on vähem spetsiifiline. |
Kokkuvõte - immunofluorestsents vs immunohistokeemia
Molekulaarsed mehhanismid on meditsiinivaldkonnas kaasa toonud palju muudatusi, mis on andnud alguse arenenud molekulaarsete testimismeetodite kasutusele võtmiseks, mis on toonud kaasa pöördeid diagnostika valdkonnas. Need leiutised on viinud haiguse kiire ja täpse tuvastamiseni ja kinnitamiseni, võimaldades seeläbi ravimite edukat manustamist ja tootmist. Neid meetodeid kasutatakse ka farmakoloogias, et leida ravimite sihtmärke ja kinnitada ravimi farmakokineetilisi omadusi ravimi metabolismi ajal. IF ja IHC on kaks diagnostilist meetodit, mis põhinevad antigeeni ja antikeha seondumise kontseptsioonil, ehkki mõlema tehnika avastamisviis erineb. IF kasutab antigeeni tuvastamiseks fluorestsentsi põhimõtet ja IHC kasutab antigeeni tuvastamiseks keemilise konjugatsiooni kontseptsiooni. See on vahe IF ja IHC vahel.
Laadige alla immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia PDF-i versioon
Selle artikli PDF-versiooni saate alla laadida ja kasutada võrguühenduseta eesmärkidel, nagu tsiteeritud. Laadige siit alla PDF-versioon. Erinevus immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia vahel.
