Peamine erinevus - horisontaalne vs vertikaalne geelelektroforees
Geelelektroforees on laboratoorsed meetodid, mida kasutatakse geneetikas DNA, RNA ja muude valkude sisaldavate segude eraldamiseks vastavalt nende vastavale laengule ja molekulaarsuurusele. Selles meetodis eraldamiseks vajalik DNA, RNA või valgud lastakse läbi geeli, mis sisaldab väikesi poore. Molekulid juhitakse läbi geeli elektrivälja abil. Molekulid läbivad geeli poorid ja liikumiskiirus on pöördvõrdeline nende vastavate pikkustega. Seetõttu liiguvad väiksema molekulmõõduga molekulid kiiremini kui suurema molekulmassiga molekulid. Elektrivälja tekitab geeli kahe otsa laengute erinevus. Üks ots sisaldab positiivset laengut ja teine ots negatiivset laengut. Kuna DNA ja RNA molekulid on negatiivselt laetud,nad tõmbuvad geeli positiivselt laetud otsa poole. Geelelektroforeesil võib olla kaks erinevat meetodit: horisontaalne geelelektroforees ja vertikaalne geelelektroforees. Horisontaalse geelelektroforeesi korral on geel horisontaalses asendis ja uputatakse pideva töötava puhvrini, mis asub geelikarbi enda sees. Vertikaalse geelelektroforeesi korral on puhvrisüsteem orienteeritud vertikaalselt ja on katkendlik kahe ülemise ja alumise kambri korral vastavalt katoodi ja anoodiga. See on peamine erinevus horisontaalse ja vertikaalse geelelektroforeesi vahel.geel on horisontaalses asendis ja sukeldatud pideva töötava puhvrini, mis asub geelikarbi enda sees. Vertikaalse geelelektroforeesi korral on puhvrisüsteem orienteeritud vertikaalselt ja on katkendlik kahe ülemise ja alumise kambri korral vastavalt katoodi ja anoodiga. See on peamine erinevus horisontaalse ja vertikaalse geelelektroforeesi vahel.geel on horisontaalses asendis ja uputatakse pideva tööpuhvrisse, mis asub geelikarbi enda sees. Vertikaalse geelelektroforeesi korral on puhvrisüsteem orienteeritud vertikaalselt ja on katkendlik kahe ülemise ja alumise kambri korral vastavalt katoodi ja anoodiga. See on peamine erinevus horisontaalse ja vertikaalse geelelektroforeesi vahel.
SISU
1. Ülevaade ja peamine erinevus
2. Mis on horisontaalse geeli elektroforees
3. Mis on vertikaalse geeli elektroforees
4. Horisontaalse ja vertikaalse geeli elektroforeesi sarnasused
5. Kõrvuti võrdlus - horisontaalne vs vertikaalne geeli elektroforees tabelina
6. Kokkuvõte
Mis on horisontaalne geelelektroforees?
Horisontaalne geelelektroforees kasutab põhiteooriat DNA, RNA või valgu molekulide eraldamiseks vastavalt nende molekulide suurusele ja laengule. Selles tehnikas on geel horisontaalses asendis ja sukeldatud pidevasse puhvrisse. Agaroosgeeli kasutatakse geelikarbi eraldamiseks kaheks kambriks. Geelikarbi üks ots sisaldab anoodi, teine ots aga katoodi. Voolu rakendamisel võimaldab selles tehnikas kasutatav puhver luua laadungi gradiendi. Laengu rakendamisel kipub geel kuumenema. Puhver toimib ka jahutusvedelikuna, mis hoiab temperatuuri optimaalsel tasemel. Jooksupuhvri ringlus välistab pH gradiendi moodustumise. Katkendlikku puhvrisüsteemi ei saa horisontaalses geelelektroforeesis kasutada, kuna geelisüsteemi kaks sektsiooni ühendatakse töötava puhvriga. Akrüülamiidi kasutatakse geelelektroforeesi käigus valgusegude eraldamiseks.
Joonis 01: Horisontaalse geeli elektroforees
Horisontaalse geelelektroforeesi korral ei saa akrüülamiidi kasutada, kuna geelkarp puutub kokku hapnikuga. Hapniku olemasolu tõttu on akrüülamiidi polümerisatsioon pärsitud ja see häirib geeli moodustumist. Horisontaalne geelelektroforees on vaevatu meetod, mida kasutatakse DNA ja RNA eraldamiseks.
Mis on vertikaalse geeli elektroforees?
Vertikaalse geelelektroforeesi tehnika toimib geelelektroforeesi esmase teooria kohaselt, kuid seda peetakse keerulisemaks kui horisontaalse geelelektroforeesi meetodit. See meetod kasutab katkendlikku puhvrit. Katood asub ülemises kambris ja anood alumises kambris. Igas kambris olevad elektroodid tagavad vajaliku elektrivälja. Kahe paigaldatud klaasplaadi vahele valatakse õhuke kiht geeli. Seetõttu uputatakse geeli ülemine osa ülemisse kambrisse ja geeli alumine osa sukeldatakse põhjas asuvasse kambrisse. Kui vool on rakendatud, liigub väike osa puhvrist geeli kaudu ülemisest kambrist alumisse kambrisse. Selles tehnikas rakendatav vool on minutühikutes.
Joonis 02: Vertikaalse geeli elektroforees
Vertikaalse geelelektroforeesi korral voolab puhver läbi geeli ainult. See võimaldab täpselt kontrollida pinge gradienti eraldusetapis. Akrüülamiidgeeli võib kasutada, kuna kambrid ei puutu kokku atmosfääri hapnikuga. Akrüülamiidgeeli väiksema poorisuuruse tõttu on võimalik suurema eraldusvõimega saavutada täpne eraldamine.
Millised on horisontaalse ja vertikaalse geeli elektroforeesi sarnasused?
- Mõlemad süsteemid toimivad vastavalt geelelektroforeesi põhiteooriale.
- Vajaliku elektrivälja tagamiseks mõlemas süsteemis kasutatakse anoodi ja katoodi.
Mis vahe on geeli horisontaalse ja vertikaalse elektroforeesi vahel?
Erinev artikkel keskel enne tabelit
Horisontaalne vs vertikaalne geelelektroforees |
|
| Horisontaalne geelelektroforees on geelelektroforeesi tehnika, mille korral geel on horisontaalses asendis. | Vertikaalse geeli elektroforees on geelelektroforeesi tehnika, mille korral geel on suunatud vertikaalselt. |
| Puhver | |
| Horisontaalne geelelektroforees koosneb pidevast puhvrist. | Tööpuhver on vertikaalse geelelektroforeesi korral katkendlik. |
| Akrüülamiidi kasutamine | |
| Akrüülamiidi ei saa kasutada horisontaalse geelelektroforeesi jaoks, kuna geelkarp on avatud atmosfääri hapnikule. | Kuna geel ei puutu atmosfääri hapnikuga kokku kahe eraldi kambri tõttu, võib vertikaalse geelelektroforeesi jaoks kasutada akrüülamiidi. |
| Funktsioon | |
| Horisontaalset geelelektroforeesi kasutatakse sagedamini DNA ja RNA segude, kuid mitte valkude eraldamiseks. | Valgu segude eraldamiseks kasutatakse vertikaalset geelelektroforeesi. |
Kokkuvõte - horisontaalne vs vertikaalne geelelektroforees
Geelelektroforees on laboritehnika, mida kasutatakse laialdaselt DNA, RNA ja valkude molekule sisaldavate segude eraldamisel. Geelelektroforeesil on kaks meetodit: horisontaalne ja vertikaalne geelelektroforees. Horisontaalse geelelektroforeesi korral on töötav puhver pidev, vertikaalse geelelektroforeesi korral aga katkendlik. See on erinevus horisontaalse ja vertikaalse geelelektroforeesi vahel. Mõlemad süsteemid toimivad vastavalt geelelektroforeesi ühisele põhimõttele.
Laadige alla horisontaalse ja vertikaalse geeli elektroforeesi PDF-versioon
Selle artikli PDF-versiooni saate alla laadida ja kasutada võrguühenduseta eesmärkidel, nagu tsiteeritud. Palun laadige siit alla PDF-versioon. Erinevus horisontaalse ja vertikaalse geeli elektroforeesi vahel.
